柑橘半胱氨酸蛋白酶基因cscysp的分离、亚细胞定位及表达分析

以‘奥林达’夏橙[citrussinensis（l.）‘olinda’]为材料，采用rt-pcr结合race技术从果萼离层中分离到1个半胱氨酸蛋白酶类基因，命名为cscysp（genbank登录号：kj093387）。该基因的cdna全长为1485bp，开放阅读框（orf）为1083bp，推测可编码360个氨基酸残基的多肽。其基因组序列与cdna比对后显示有3个内含子。分析发现，cscysp属于papain-like（木瓜蛋白酶，c1a）家族的半胱氨酸蛋白酶，与拟南芥、大豆、烟草、杨树等的同源蛋白有73%~83%的相似性。亚细胞定位结果显示cscysp蛋白定位在细胞壁上。qrt-pcr结果表明cscysp在老叶、成熟果实果萼离层和花中的表达量明显高于幼苗的根、茎、叶。cscysp的表达被脱落酸、高盐和peg6000诱导，低温、乙烯、芸薹素内酯、水杨酸和甲基茉莉酸可抑制其表达。利用基因工程手段获得了柑橘过表达cscysp的5个转基因株系。