芥菜开花调控蛋白svp与flc酵母表达载体的构建及其相互作用研究

为深入研究芥菜开花信号整合子的两个核心调节因子shortvegetativephase（svp）与floweringlocusc（flc）相互作用的分子机理，通过pcr扩增，从芥菜材料‘qj’中分别克隆含ecorⅰ/bamhⅰ双酶切位点的svp和flc编码区全长，并利用酵母双杂交体系，将flc与gal4报告基因dna激活域融合（pgadt7flc），svp与gal4报告基因dna结合域融合（pgbkt7svp）。两种重组质粒分别转化酵母y187和y2hgold后未出现自激活和毒性现象。融合的二倍体酵母（pgadt7flc×pgbkt7svp）能在选择性固体培养基qdo/x/a（sd/-ade/-his/-leu/-trp/x-α-gal/aba）上生长，并且菌落呈蓝色。将诱饵质粒（pgbkt7svp）与猎物质粒（pgadt7flc）载体互换（pgadt7svp、pgbkt7flc），再次转化酵母后仍能融合成二倍体酵母（pgadt7svp×pgbkt7flc），并同时激活报告基因aur1-c、his3、ade2、mel1，由此表明svp与flc蛋白能够相互结合。