马铃薯抗晚疫病基因rb、r3a过表达及r3a特异性识别关键结构域的确定

通过将马铃薯抗晚疫病基因rb、r3a编码区克隆到具有组成型camv35s强启动子的双元表达载体上，结合农杆菌介导的瞬时表达，分析过表达条件下rb-avrb，r3a-avr3a的特异性识别情况。并利用重叠延伸pcr实现r3a与同源序列i2ga1在卷曲螺旋（cc）、核酸结合位点（nbs）和富含亮氨酸重复序列（lrr）三个结构域的互换，根据过敏性反应（hypersensitiveresponse，hr）是否被阻断分析各个结构域对特异性识别的影响，确定特异性识别的关键结构域。结果表明：camv35s启动子驱动的rb基因在表达量上较自身启动子有明显提高，使hr反应加快;r3a的表达量和特异性识别avr3a诱导产生hr反应的速度在两者之间均无明显差别。另外，r3a与i2ga1在lrr区域序列发生交换后，识别avr3a诱导产生hr反应的能力也发生了交换，即r3a特异性识别avr3a的关键序列位于lrr结构域内。