HARDY基因的克隆、原核表达及其植物表达载体的构建

为了给转HARDY（HRD）基因小麦研究奠定基础，利用PCR技术从拟南芥中克隆HRD基因，进行生物信息学分析，预测其编码的蛋白质结构与功能，构建原核表达载体pET28a(+)HRD，转化大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导蛋白的表达，同时构建pBinHRD植物表达载体。测序分析结果表明，克隆的HRD与NCBI发布的拟南芥核苷酸序列的同源性为99%，其开放阅读框长555bp，可编码184个氨基酸，具有许多重要功能位点；成功构建了原核表达载体pET28a(+)HRD和植物表达载体pBinHRD，诱导表达出大小约为23.3kD的蛋白，与理论值相近。