小麦ArfGAP基因的克隆、半定量RT-PCR分析及原核表达

为明确小麦ArfGAP基因在非生物胁迫中所行使的功能，采用电子克隆技术分离普通小麦ArfGAP基因后对其在不同非生物胁迫下的表达特性进行了分析，并在大肠杆菌中表达了该基因。结果表明，从扬麦18号中克隆得到的TaArfGAP基因ORF全长为2121bp。生物信息学分析表明，TaArfGAP蛋白氨基端方向存在一个典型的ArfGAP蛋白结构域，在亲缘关系上与山羊草、乌拉尔图小麦和短柄草较近，而与甘蓝等作物关系较远。半定量RT-PCR分析表明，TaArfGAP基因在干旱、PEG和NaCl胁迫下显著上调表达，但在高温条件下则显著下调表达。SDS-PAGE检测结果表明，IPTG终浓度为0.8~1.0mmol·L-1、诱导温度为24℃及诱导时间为10h时，在分子量大小为81kD左右可以得到较大的可溶性表达蛋白量，且与预期结果一致，说明TaArfGAP基因在原核表达体系中成功表达。