内参法在线粒体DNA纯度鉴定中的应用

为了确定普通差速离心法提取的小麦线粒体DNA（mtDNA）的纯度，以小麦肌动蛋白β亚基（βActin）、1,5二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶大亚基（RabcL）和细胞色素C氧化酶第三亚基（COXIII）基因的片段作为内参标记，依靠聚合酶链式反应（PCR）及琼脂糖凝胶电泳技术，对提取的mtDNA进行了检测。结果表明，普通差速离心法提取的mtDNA中混杂有核DNA和叶绿体DNA（ctDNA）。对提取的mtDNA稀释后再进行内参法检测，结果发现，当mtDNA稀释到DNA原液的300~400倍时，混杂其中的核DNA已达不到PCR反应的敏感度，但mtDNA、ctDNA仍能满足作为PCR反应体系模板的要求。此时，提取到的mtDNA可视为无核DNA污染的细胞质基因组DNA。