柑橘无标记转基因转化体系的建立

采用1个结合化学诱导系统XVE和位点专一性重组系统Cre/LoxP的标记基因剔除载体，对柑橘进行无标记转基因研究．此载体可通过β-雌二醇诱导表达系统控制重组酶系统Cre 基因表达来剔除标记基因nptⅡ．将侵染后糖橙节间茎段接种在(MS+3 mg/L BA)培养基上，共培养(暗培养)3 d后转移到筛选培养基（MS+75 mg/L Kan+500 mg/L Cef）中．在筛选抗性再生芽后，切下带1~2 mm外植体的抗性芽，转移至含有？-雌二醇的化学诱导培养基( MS+3 mg/L BA+ 500 mg/L 头孢霉素+2 μmol/L ？-雌二醇)上诱导，15 d后用荧光显微镜观察，成功观测到绿色荧光．进行试管嫁接，30 d后，提取接穗基因组DNA进行PCR扩增，检测到DNA的切除现象．研究结果表明此化学诱导切除标记基因系统应用在柑橘上是可行的．