谷胱甘肽合成酶系基因协调表达体系的构建

通过PCR获得E.coliB谷胱甘肽合成酶系基因(gshI,gshII)片段,结合定点突变稀有起始密码子,设定gshI与gshII位置与距离,构建双顺反子重组表达载体pTrc99A/gshI-gshII,建立GSHI、GSH-II蛋白表达体系。结果表明:以0.08mmol/LIPTG于28℃诱导工程菌E.coliBL21(DE3)(pTrc99A/gshI-gshII),GSH-I、GSH-II蛋白比为4.5∶1(m∶m)时谷胱甘肽合成能力最高,达到每克湿菌体8.5mg。通过构建单顺反子重组表达载体pTrc99A/gshI、pTrc99A/gshII测定GSH-I与GSH-II蛋白的最适配比,结果表明:在GSH-I、GSH-II蛋白总量恒定的情况下,要提高谷胱甘肽产率,两者比例以3∶1～6∶1为宜