哈尔滨产乙醇杆菌属AFLP反应体系的建立与优化

为建立和优化适合于哈尔滨产乙醇杆菌属基因组AFLP分析的技术体系,以哈尔滨产乙醇杆菌属Ethanoligenensharbinense为研究材料,对AFLP反应体系的几个关键参数进行探讨和优化.结果表明,20μL反应体系中,用于酶切的基因组DNA的纯度(OD260/OD280)和质量分别为1.8～1.9和50～100ng之间为宜;限制性内切酶(EcoRI/MseI)组合的最佳酶切用量和酶切时间分别为EcoRI(2.0μL)/MseI(0.7μL)和3h;琼脂糖凝胶电泳图谱对比显示,利用EcoRI-A/MseI-G、EcoRI-G/MseI-A、EcoRI-G/MseI-C、EcoRI-T/MseI-A、EcoRI-T/MseI-C、EcoRI-T/MseI-G和EcoRI-T/MseI-T7个选择性扩增引物组合选扩出的条带稳定、清晰、无背景干扰,能够很好地反映哈尔滨产乙醇发酵细菌间DNA指纹图谱的多态性分布,为构建发酵产氢细菌AFLP图谱和种间遗传多样性奠定基础.