普通小麦7B染色体的显微分离和低拷贝专化DNA序列的克隆

以普通小麦“中国春”7B单体的花粉母细胞为材料,显微分离出7B染色体.经蛋白酶K和DNA拓扑异构酶Ⅰ处理后进行1～3轮DOPPCR扩增,产生了150～700bp的连续DNA片段.基因组Southern杂交证实扩增的DNA源自小麦基因组.将大于200bp的第3轮PCR扩增产物(50μL)克隆后,可产生20000个重组克隆.对随机选取的50个克隆分析表明,其中21个克隆产生了大小为240～600bp的清晰PCR产物.点杂交结果表明,21个克隆中11个(～55%)为低拷贝序列,10个(～45%)为重复序列.对“中国春”全套“缺体四体”基因组DNA的Southern杂交结果表明,产生清晰杂交谱带的6个低拷贝克隆均为7B染色体专化或第7部分同源群专化序列;而随机选取的3个重复序列则为没有专化性的弥散型重复序列.