家蝇Denfensin-1基因的克隆、诱导表达及启动子活性分析

【目的】鉴定一种新的家蝇Muscadomestica防御素基因，并分析其功能。【方法】从家蝇转录组数据库中鉴定了1条新的防御素基因cDNA序列，并将其命名为家蝇防御素1(Md-defensin-1)基因Mdde-1。利用生物信息学网站、软件预测其结构等信息。以实时荧光定量PCR技术研究该基因的表达模式，并且利用基因步移技术获得了启动子序列，同时采取细胞转染技术验证Mdde-1启动子活性。【结果】该序列包含一个276bp的开放阅读框，编码91个氨基酸残基。推导的氨基酸序列N端包括1个23个氨基酸残基的信号肽和1个28个氨基酸残基的前肽。成熟肽由40个氨基酸残基组成，含有1个典型的CSαβ基序。实时荧光定量PCR结果显示，家蝇2龄幼虫受金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus(G+)刺激后Mdde-1表达明显上调，而大肠杆菌Escherichiacoli(G-)刺激后表达下调；Mdde-1在家蝇幼虫受到热激时呈上调表达。为进一步研究其调控机制，克隆了Mdde-1启动子，并证明了该启动子具有活性。【结论】据此认为Mdde-1是一种新的家蝇防御素，并且在免疫革兰氏阳性菌方面发挥重要作用；同时我们首先证明了Mdde-1的启动子具有活性。本研究为进一步研究家蝇防御素的作用机制奠定了基础。