野桑蚕卵黄原蛋白的鉴定及cDNA序列分析

利用SDS-PAGE和Westernblot方法分析鉴定了野桑蚕BombyxmandarinaMoore卵黄原蛋白，发现该蛋白由大小两个亚基组成，分子量分别为175kD和42kD。利用昆虫卵黄原蛋白进化上的保守性，根据家蚕的卵黄原蛋白cDNA序列设计特异性引物在野桑蚕的总RNA进行RT-PCR扩增，对于3′和5′端进行RACE扩增，解析获得了野桑蚕卵黄原蛋白cDNA全序列(GenBank登录号AY309967)。该序列含有5.754个碱基，由一个开放阅读框组成，编码1.780个氨基酸，卵黄原蛋白的氨基酸序列与家蚕的同源性达到97.6%。在特定的酶切位点(RSRR)处，即第364～367个氨基酸位置，卵黄原蛋白前体被酶切为大小两个亚基，根据氨基酸推算的相对分子质量分别为161.571kD和40.794kD，如果考虑到翻译后的修饰，这与SDS-PAGE的结果是吻合的。同源性分析表明，昆虫卵黄原蛋白一级结构分化基本上局限在同一目内，具有较高的保守性。