粉尘螨Ⅰ类变应原(DerfⅠ)的克隆表达、纯化及免疫学特性

粉尘螨Ⅰ类变应原(DerfⅠ)是粉尘螨Dermatophagoidesfarinae主要变应原，可引发Ⅰ型变态反应。挑取纯培养的粉尘螨，提取总RNA，采用RT-PCR方法有效地扩增出DerfⅠ片段，产物连接入T载体(pMD18)。经扩增后，用NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后将目的片段连接到pET24a表达载体上，得到重组质粒pET24a-DerfⅠ，工程菌经IPTG诱导培养，高效表达出DerfⅠ蛋白，该蛋白主要以包涵体形式存在。表达产物经亲和层析纯化，用Westernblot及ELISA方法检测免疫学活性，结果表明目的蛋白具有良好的免疫原性。