粘虫中肠α-淀粉酶活性测定方法的参数优化

针对粘虫Mythimnaseparata中肠α-淀粉酶筛选了11种不同参数组合的3，5－二硝基水杨酸活性测定方法，并对其中最适组合的各个参数进行了优化。结果表明：在离体测定条件下，粘虫中肠α-淀粉酶活性的最优化测定参数为0.03mol/L磷酸盐缓冲液（pH8.0，含有55mmol/LNaCl）、温度45℃、吸收波长480nm。Ca2+对α-淀粉酶活性具有抑制作用。该优化法能够显著降低粘虫、德国小蠊Blattellagermanica、黄粉虫Tenebriomolitor、淡色库蚊Culexpipienspallens和家蝇Muscadomestica等昆虫α-淀粉酶的米氏常数Km值，且粘虫和德国小蠊α-淀粉酶的Vmax值增大，但黄粉虫、淡色库蚊和家蝇α-淀粉酶的Vmax值均明显减小。结果说明，在该优化体系下，粘虫α-淀粉酶与底物的亲和力增强，最大反应速度增大，测定酶活性的准确性和灵敏度显著提高；同时该优化体系也可作为测定德国小蠊α-淀粉酶活性的优化方法，但不适合作为黄粉虫、淡色库蚊和家蝇α-淀粉酶的最优化测定方法。