家蚕溶茧酶基因的真核表达及其产物的生物活性检测

为了研究家蚕Bombyxmori溶茧酶基因（cocoonae）真核表达及其产物的生物活性，将溶茧酶基因（GenBank登录号EF428980）克隆至杆状病毒转移载体pFastBacTM1中获得pFast-cocoonase，将其转化DH10Bac感受态细胞后，PCR方法检测证实所分离的重组病毒DNA中含有目的片段溶茧酶基因。用脂质体法转染家蚕BmN细胞，获得重组病毒。SDS-PAGE分析显示，感染重组杆状病毒Bac-cocoonase的细胞表达产物在约为27.6kD处出现特异性条带，这与预测的蛋白大小相符。用该表达产物与茧丝反应后，电镜下观察茧丝的形态，结果表明表达产物对茧丝的丝胶层有一定的水解作用。