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ISSN: 2333-9721
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核农学报  2014 

药用菊花SCoT-PCR反应体系的正交优化

DOI: 10.11869/j.issn.100-8551.2014.10.1781, PP. 1781-1789

Keywords: 药用菊花,SCoT,优化,正交设计

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Abstract:

为进一步开发利用药用菊花种质资源,为药用菊花的遗传多样性及分子鉴定研究提供技术支持,建立并优化药用菊花的目标起始密码子多态性-聚合酶链式反应(SCoT-PCR)体系,在方差分析基础上,运用L25(56)正交设计在5个水平上对影响药用菊花SCoT-PCR反应的模板DNA、Mg2+、dNTPs、Taq酶、引物5个因素进行优化试验,并对PCR结果进行分析.建立了药用菊花SCoT-PCR最佳反应体系(20μL):模板DNA10ng,引物0.8μmol·L-1,dNTPs0.2mmol·L-1,Mg2+2.0mmol·L-1,Taq酶1.5U,SCoT反应的影响因素依次为:Taq酶>引物>dNTPs>Mg2+>模板DNA.优化的SCoT-PCR反应体系在多个药用菊花品种遗传多样性研究中得到了验证,结果表现出良好的稳定性、重复性和多态性丰富等特点,该体系的建立为药用菊花品种遗传多样性分析、系统发育研究、遗传图谱构建、基因定位和分子标记辅助育种研究奠定了基础.

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