结缕草SSR反应体系的正交优化(英文)

为了快速获得结缕草(Zoysiajaponica)SSR反应体系,采用5因素(模板DNA,Mg2+,dNTP,Taq酶和引物)4水平正交设计筛选合适的结缕草SSR体系,并通过随机挑选3对Tm相近的引物对该优化体系进行验证。结果表明正交设计可应用于SSR-PCR反应体系的优化,20μl最佳PCR反应体系中包括2μl10×buffer、1.0UTaq酶、0.2mM引物、100ng模板DNA、0.2mMdNTP、2.0mMMg+;对结缕草进行梯度退火实验,其最佳退火温度为56-58℃;可行扩增程序是94℃预变性4min、进行35个循环的94℃变性30s、56-58℃退火40s,72℃延伸1min;72℃延伸10min,4℃保存;该最适反应体系的建立,为今后结缕草SSR分析奠定了坚实基础。