基因打靶载体选择标记盒的构建及表达

？？？？为构建山羊乳腺基因打靶载体的选择标记盒,将loxP位点分别引入正、反向引物,以含新霉素磷酸转移酶(neo)基因的质粒pTarget为模板,用高保真聚合酶链反应(PCR)扩增得loxPneoloxP选择标记盒。将PCR产物克隆到pGEMT载体后进行的序列分析结果显示,引入的loxP位点及扩增后的neo基因序列均是正确的。将此选择标记盒克隆到不含neo基因的真核表达载体ΔpTarget后转染COS1细胞,经过G418筛选获得药物抗性细胞克隆。再将此选择标记盒克隆到山羊β乳球蛋白基因打靶载体并转染山羊成纤维细胞,经过G418选择后也获得抗性细胞克隆。结果表明:克隆的loxPneoloxP选择标记盒可用于基因打靶载体的构建。