正交设计优化草地早熟禾SRAPPCR反应体系及引物筛选

？采用L9(34)正交试验设计方法，对草地早熟禾(Poapratensis)基因组DNASRAPPCR反应体系中的TaqDNA聚合酶、Mg2+、引物及dNTP四因素的用量进行优化，并比较不同模板DNA用量对扩增的影响，建立草地早熟禾SRAPPCR最佳反应体系，同时，利用该体系对SRAP引物进行筛选。结果表明，草地早熟禾SRAPPCR最佳反应体系为TaqDNA聚合酶1.0U、Mg2+1.75mmol·L-1、引物0.25μmol·L-1、dNTP220μmol·L-1、40ng模板DNA、2μL10×PCRbuffer，总体积20μL。运用该体系从100对SRAP引物中筛选出43对引物能够产生清晰稳定的扩增条带且多态性丰富。优化体系的建立及引物的筛选可为今后利用SRAP标记技术对草地早熟禾进行遗传多样性分析、图谱构建、种质资源鉴定奠定技术基础。