家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂20的表达特征分析

【目的】原核表达家蚕bombyxmori丝氨酸蛋白酶抑制剂20（serineproteinaseinhibitor20，bmserpin-20），分析bmserpin-20基因和蛋白组织表达分布特点，以及不同外源病原物刺激家蚕后bmserpin-20基因的表达模式。【方法】利用pet-28a表达载体在大肠杆菌transetta(de3)中融合表达bmserpin-20蛋白，利用纯化的重组蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，利用实时定量pcr技术及westernblot方法分别分析bmserpin-20基因和蛋白的组织表达水平，以及病原物免疫刺激后的表达模式。【结果】在大肠杆菌中正确表达和纯化了融合bmserpin-20蛋白，并制备了多克隆抗体；bmserpin-20基因和蛋白在脂肪体、中肠、血细胞、马氏管、表皮、睾丸、卵巢中均有表达，且在表皮中表达量最高；家蚕5龄幼虫经核型多角体病毒（nuclearpolyhedrosisviruses）、藤黄微球菌micrococcusluteus、大肠杆菌escherichiacoli、白僵菌beauveriabassiana处理后，bmserpin-20基因表达量先下调而后上调,但不同病原物在不同时间的影响不尽相同。【结论】研究了bmserpin-20基因和蛋白的表达模式，为下一步研究其在家蚕免疫系统中的作用奠定了基础。