Análisis Cinético del proceso de termo inactivación de la Aminoacilasa I

De todos los métodos de separación de los racematos de los aminoácidos D y L el que tiene mayor aplicabilidad es la hidrólisis estereoselectiva de N-acil aminoácidos por diferentes Acilasas La Acilasa I (C.E.3.5.1.14) es un dímero con una masa molecular de 85500 y cada subunidad está constituida por 772 aa. La importancia práctica de esta enzima es la gran esteroespecificidad en relación con los derivados acilicos de N-aminoacidos. Las Acilasas de diferente origen tienen una amplia aplicación en biotecnología para la separación de mezclas racémicas de aminoácidos en forma de catalizadores heterogéneos insolubles. La Acilasa I es una enzima dimérica y la cinética de termo inactivación de las enzimas diméricas se realiza en dos etapas y corresponde al mecanismo cinético de termo inactivación disociactiva de un dímero activo, que se disocia fácil y reversiblemente en subunidades inactivas. Objetivo: Estudiar las propiedades del proceso de asociación-disociación de la Acilasa I y la termo inactivacion de la Acilasa I Materiales y métodos: Se utilizo un preparado de Aminoacilasa I de ri ones de cerdo de la firma Reanal.-El sustrato utilizado es el N-acetil-D-L Metionina de la firma Fluka. La actividad de la acilasa I se determinó en el espectrofotómetro Hitachi 124 a 238 nm. La concentración del sustrato fue de 0.2 M en 0.15 M tampón fosfato pH 7,25. Resultados: La actividad especifica de la acilasa I disminuye con el aumento de la concentración de la Enzima, esto está relacionado con la asociación de la Acilasa I en formas menos activas de la Enzima Se estudio el esquema cinético de termo inactivación de la enzima dimerica - Acilasa I que incluye la disociación reversible del dímero activo en monómeros inactivos y la inactivación de los monómeros. Se calculan los parámetros cinéticos característicos de la termo inactivación de una enzima dimerica . Se estudia la influencia del producto de la reacción L Metionina en los procesos asociativos disociativos de la Acilasa I. Conclusiones: La acilasa I es un enzima asociativa del tipo alostèrico.- La L-Metionina activa la reacción catalizada por la Acilasa I , la activación se logra como resultado de la disociación de formas oligomericas inactivas de la Acilasa I hasta el dimero activo para concentraciones altas de L-Metionina Se amplia el marco del análisis cinético de los procesos de inactivación de sistemas complejos, los cuales no se pueden describir completamente por los esquemas cinéticos.