Tipificación molecular por PCR-RFLPS de cepas trypanosoma sp. aisladas en campo y evaluación de ganados de la Orinoquia colombiana

En este estudio se presentan los primeros resultados obtenidos al utilizar como una herramienta diagnóstica, técnicas moleculares de PCR y RFLPs sobre la subunidad ribosomal 18S del DNA del Trypanosoma. La PCR-RFLPs se estandarizó al utilizar tres cepas de Trypanosoma (Trypanosoma vivax, Trypanosoma evansi y Trypanosoma theileri) pertenecientes al Banco de Germoplasma de Hemoparásitos de Corpoica, las cuales fueron multiplicadas en ovinos de lana y purificadas por medio del método de cromatografía de intercambio iónico. Con la PCR semianidada se obtuvieron los primeros amplificados de las tres cepas de Trypanosoma entre 700 a 800 pb, y de 600 a 700 pb en la segunda amplificación. Usando las enzimas de digestión MspI y Eco57I se obtuvieron diferentes perfiles diferenciando las infecciones por Trypanosoma vivax, Trypanosoma evansi y Trypanosoma theileri. Con base en la información obtenida con las tres cepas de Tripanosoma, se trabajaron 70 muestras de sangre de ganados del piedemonte llanero, colectadas por el método del Buffy coat, los cuales fueron reportados como negativos a Trypanosoma bajo pruebas parasitológicas de Woo y extendido de sangre. De las 70 muestras bovinas, con la PCR se detectaron como animales positivos a trypanosoma un 7,14%, con niveles de sensibilidad en campo de la prueba de 25 trypanosomas/ml de sangre parasitada. De los animales positivos, los patrones de digestión obtenidos correspondieron a la cepa Trypanosoma theileri en un 80%, y un 20% a la cepa Trypanosoma vivax. Los resultados que se obtuvieron del estudio morfométrico en las especies T. vivax y T. evansi del Banco de Germoplasma de Corpoica, mostraron que el T. vivax es un parásito con mayor longitud (20-25 μm) que el T. evansi (18-19 μm), aunque el flagelo libre de este último siempre fue mayor (7-9 μm) al igual que el diámetro de su núcleo. En ambos parásitos la posición del núcleo fue central y la posición del quinetolasto terminal.