拟南芥磷酸肌醇特异性磷脂酶AtPLC6基因的克隆与表达

利用文库筛选和RT-PCR方法、从拟南芥中克隆到长度为1954bp，包括全长1734bp编码区的AtPLC6 cDNA．推测其编码一含有578个氨基酸的多肽、其等电点为7．24，分子量为66251．84Da．在GenBank中进行序列比对发现，AtPLC6为一新发现的拟南芥PI-PLC基因．对推测的氨基酸序列结构的分析表明，AtPLC6具有EF手性结构、X结构域、Y结构域和C2结构域，与植物中已知的其他磷酸肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)在结构上相似，类似于动物中典型的δ-型磷酸肌醇特异性磷脂酶．将AtPLC6的编码区序列插入原核表达载体后进行了原核表达，纯化的AtPLC6重组蛋白可水解PIP2产生IP3和DAG，且水解活性呈明显的钙依赖特性、反应的最适Ca^2 浓度为10μmol／L.Northern分析结果表明，在检测的根、茎、叶、花、果和幼苗中均有ArLC6 mRNA的转录，但转录水平较低．用ABA，NaCl，冷和热等胁迫处理的实验表明，AtPLC6 mRNA的转录受到冷胁迫的诱导，而受ABA，NaCl和热等胁迫影响较小，推测AtPLC6可能参与了植株对冷胁迫的响应．