THE CONSTRUCTION OF DNA VECTOR AND SPHEROPLAST TRANSFORMATION AND REGENERATION OF USTILAGO MAYDIS
玉米黑粉菌DNA载体的构建和它的原生质球的转化和再生

我们用玉米黑粉菌(Ustilago maydis)热休克基因(Heat shock gene hsp 70)的启动子和终止子与新霉素磷酸转移酶基因相连，构建成了有效的双功能质粒pDLl(在E。Coli中用Amp作为选择标记，在玉米黑粉菌中用新霉素作为选择标记)o以分离的一株新霉素敏感的玉米黑粉菌作为受体菌，用构建的pDLl质粒作为供体DNA，对影响受体菌原生质球的形成条件(培养基、菌龄、各种酶、酶的浓度、作用时间和渗透压稳定剂)、再生条件和DNA转化条件进行了初步研究。对数前中期收集的菌体，以5mg／m1真菌溶壁酶处理30分钟左右，90％都形成原生质球，其再生率为60—80％，转化率为300—1000转化子/μg DNA。随机选出25个转化子，DNA杂交都为阳性。分析dot-blot和Southern blot DNA杂交结果，发现质粒在细胞中以整合形式存在，一个细胞可以有多拷贝的整合质粒，质粒可能以非完 全同源性的重组形式，参人性地整合进染色体中。