TaqMan-MGB probe real-time fluorescence quantitative RT-PCR for rapid detection of taura syndrome virus in shrimps
TaqMan-MGB探针法快速检测对虾Taura合征病毒的研究

为建立Taura综合征病毒（Taura syndrome virus，简称TSV）的TaqMan—MGB探针荧光定量RT-PC方法，根据TSV衣壳蛋白基因保守序列设计引物和TaqMan—MGB探针，扩增产物长度为118bp。将PCR产物克隆到pGM—T载体，重组质粒经筛选鉴定、SalⅠ单酶切，得到线性化转录模板DNA，经体外转录获得标准品RNA。以体外转录的RNA作为模板，进行一步法荧光定量RT-PCR反应，根据RNA模板拷贝数与Ct（Cycle threshold，Ct）值制备了标准曲线，制作的标准曲线在2×10^1拷贝／μL≤TSV RNA≤2×10^7拷贝／此的范围内具良好的线性关系，可以用于TSV的定量分析，检测灵敏度为20个拷贝数。特异性、重复性试验结果表明，该方法对SPF对虾组织RNA没有扩增反应，表现出良好的特异性；组内和组间实验变异系数分别为0．32％～1．84％和0．79％-2．71％。利用TaqMan—MGB探针建立检测TSV的一步法荧光定量RT-PCR方法可用于对虾TSV的检测。