AN ALKALINE LIPASE FROM YARROWIA LIPOLYTICA BOHAISEA-9145: GENE CLONING, HETEROLOGOUS EXPRESSION, AND CHARACTERIZATION
Bohaisea-9145海洋耶氏酵母碱性脂肪酶基因的克隆、异源表达和重组酶酶学性质

采用基因重组和分子生物学相关技术, 对Yarrowia lipolytica Bohaisea-9145海洋低温碱性脂肪酶(Y. lipolytica Bohaisea-9145, LipYp)基因lipYp (1116bp)克隆并在Pichia pastoris中进行了异源真核表达研究。通过MD和MM平板及PCR扩增, 筛选和鉴定了重组子。结果表明, 阳性重组子经摇瓶发酵54h后上清液酶活力达到1956U/ml。发酵液经两步纯化得到在SDS-PAGE上显示为单一条带的重组脂肪酶。实验同时研究了不同反应温度、pH值对重组LipYp活力和稳定性的影响, 结果显示重组LipYp最适反应温度和pH分别为35℃和8.5, 在pH 7.0—10.5之间以及45℃以下有较好稳定性。另外, 重组脂肪酶对中长链对硝基苯基酯类和甘油三酯类(C10—C12)有较强的水解能力。