THE FULL LENGTH cDNA CLONING AND EXPRESSION ANALYSIS OF KAZAL-TYPE SERINE PROTEINASE INHIBITOR GENE FROM MACROBRACHIUM NIPPONENSE
青虾(Macrobrachium nipponense)Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子基因全长cDNA的克隆及表达

采用RACE技术, 首次从青虾精巢中克隆得到KSPI基因全长cDNA。青虾KSPI基因cDNA全长890bp, 包括80bp的5′UTR, 546bp的3′UTR和编码87个氨基酸残基的264bp开放阅读框。预测蛋白包含1个保守的Kazal型结构域(CⅠX5CⅡX(6)VCⅢX(5)TYXNXCⅣX6CⅤX12CⅥ), 结构域中P1活性位点为苏氨酸残基。应用MEGA 4.1软件对青虾与已报道的虾类共15种KSPI氨基酸序列进行系统进化分析, 结果表明, 青虾KSPI与同样来源于精巢的罗氏沼虾KSPI进化关系最近聚为一支, 其它虾类来源于肝胰腺和血细胞的KSPI聚为另外两支。采用定量PCR技术分析其组织分布, 结果显示, KSPI 基因在精巢、心脏和卵巢中有较高表达, 其中精巢表达水平极高, 并与心脏和卵巢表达差异分别达到显著(P<0.05)和极显著(P<0.01)水平, 其它组织表达较弱。