Effect of DNA Methylation onIgf-2r Expression in the Development of Cloned Cattle
甲基化对牛Igf-2r表达的影响及其在克隆牛发育中的作用

摘要：目的目前认为克隆效率低的主要原因是供体核的不完全重编程（reprogramming）导致在发育过程中一些重要的基因异常表达。本文主要研究表观遗传结构对Igf-2r表达的影响及其在克隆牛发育过程中的作用。方法 首先，运用DNA甲基化转移酶抑制剂5'-脱氧胞苷（5'-azacytidine，5'-AzaC）处理MDBK细胞（牛肾上皮细胞），并通过实时荧光定量PCR方法对Igf-2r基因的表达进行定量分析。在此基础上，应用亚硫酸盐甲基化测序法检测5头克隆牛及1头正常牛脑、肺、心、肝组织Igf-2r印迹调控区DMR 2（DNA differentially methylated region，DMR）及非印迹调控区3'-UTR（3'-untranslated region，UTR）的DNA甲基化水平。结果 5'-aza处理MDBK细胞后，Igf-2r基因的表达上调。正常牛各组织中Igf-2r DMR 2区的DNA甲基化程度差异较大，3'-UTR区较稳定；与正常牛相比，克隆牛DMR 2区的甲基化程度变化较大，3'-UTR区无显著性变化。结论 DNA甲基化修饰影响Igf-2r基因的表达。正常牛不同组织中Igf-2r基因DMR 2区的DNA甲基化程度不同，提示Igf-2r基因的印迹调控方式在不同组织中可能不同。克隆牛发育过程中，调控Igf-2r基因印迹的DMR 2表观结构被明显改变，而非印迹调控区3'-UTR则无明显变化，提示Igf-2r基因印迹调控区被破坏，很可能是导致克隆牛发育异常的一个重要原因。关键词：Igf-2r，表观遗传结构，克隆牛，DNA甲基化，基因印迹