The Recombinant Expression and Receptor-binding Activity of the B Subunit of Shiga-like Toxin Type Ⅱ
Ⅱ型志贺样毒素B亚单位的重组表达及其受体结合活性

目的：在大肠杆菌中重组表达Ⅱ型志贺样毒素B亚单位（Stx2B），并对其表达形式和受体结合活性进行分析。方法：PCR方法从肠出血性大肠杆菌（EHEC）O157：H7中钓取Stx2B编码基因，利用基因克隆技术构建重组大肠杆菌pET-stx2B／BL21，IPTG诱导目的蛋白高效表达并对表达的包涵体进行变性和复性处理，离子交换层析纯化蛋白。通过SDS—PAGE变性和非变形蛋白电泳，分析重组Stx2B的表达形式，并利用Hela细胞结合模型，评价重组StX2B与细胞受体的结合活性。结果：构建的重组大肠杆菌pET-stx2B／BL21能高效表达Stx2B，经变性、复性及离子交换层析操作，获得高纯度的目的蛋白。SDS—PAGE变性和非变形蛋白电泳分析显示，重组Stx2B以二聚体形式存在，单体之间通过二硫键相连。细胞结合试验显示，重组Stx2B与Hela细胞具有特异结合活性。结论：成功构建表达Stx2B的基因工程菌，Stx2B的受体结合活性不依赖于五聚体形式。