Molecular Cloning, Prokaryotic Expression and Biological Activity of α-2,6 Sialyltransferase
α-2,6唾液酸转移酶(ST6Gal1)的cDNA克隆、原核表达及生物活性研究

克隆载体中,经序列测定后与 GenBank 中报道的已知序列比对完全一致,再将已知目的序列插入原核表达载体pET-28α(+)中.将构建正确的原核表达载体转化表达受体菌BL21(DE3)中,IPTG诱导其进行表达并鉴定目的蛋白,对鉴定正确的目的蛋白复性后经Ni2+亲和层析柱纯化获得高纯度的α-2,6 唾液酸转移酶蛋白.然后用霍乱弧菌神经氨酸酶处理健康鸡红细胞,清除鸡红细胞表面所有类型的唾液酸寡糖链;再用表达的α-2,6 唾液酸转移酶以CMP-唾液酸作为底物在霍乱弧菌神经氨酸酶处理的鸡红细胞表面标记上SAα2,6 Gal受体.将标记有SAα2,6Gal受体的鸡红细胞应用微量血凝试验和流式细胞仪进行检测,以验证所表达蛋白的生物活性.结果表明,原核表达的α-2,6唾液酸转移酶具有较好的生物活性.