Cloning, High Expression of Single-Stranded DNA-Binding Protein and Its Interaction with ssDNA
SSB蛋白的高效表达及其与ssDNA的相互作用

大肠杆菌单链结合蛋白SSB在DNA复制、重组和修复中起着重要作用。为研究单链结合蛋白SSB的体外生物功能构建了融合蛋白SSB的表达载体并使其高效表达及易于纯化。ssb基因片段是以E.coliK-12基因组为模板经PCR扩增获得,并通过基因的体外拼接成功构建了表达载体pQE30-ssb。重组菌株M15/pQE30-ssb经过IPTG的诱导表达了蛋白SSB。收集菌体细胞、超声波破碎后离心取上清进行SDS-PAGE分析,结果表明有一与预期分子量(20.6kDa)相应的诱导表达条带出现,其表达量约占全细胞蛋白的30%且以可溶形式存在。利用固定化金属离子(Ni2 )配体亲和层析柱纯化融合蛋白SSB,其纯度达到90%。通过凝胶层析和等离子共振技术对SSB的生物功能进行了系统研究分析。结果表明,SSB蛋白以四聚体形式与单链DNA分子结合,其亲和力常数(KD)为4.79×10-7mol/L。