%0 Journal Article
%T Cloning, High Expression of Single-Stranded DNA-Binding Protein and Its Interaction with ssDNA<br>SSB蛋白的高效表达及其与ssDNA的相互作用
%A QIAO Hui-li
%A CHEN Yuan-yuan
%A WEN Zhen-zhong
%A BI Li-jun
%A KAN Yun-chao
%A <br>乔惠丽
%A 陈媛媛
%A 文祯中
%A 毕利军
%A 阚云超
%J 中国生物工程杂志
%D 2007
%I 
%X 大肠杆菌单链结合蛋白SSB在DNA复制、重组和修复中起着重要作用。为研究单链结合蛋白SSB的体外生物功能构建了融合蛋白SSB的表达载体并使其高效表达及易于纯化。ssb基因片段是以E.coliK-12基因组为模板经PCR扩增获得,并通过基因的体外拼接成功构建了表达载体pQE30-ssb。重组菌株M15/pQE30-ssb经过IPTG的诱导表达了蛋白SSB。收集菌体细胞、超声波破碎后离心取上清进行SDS-PAGE分析,结果表明有一与预期分子量(20.6kDa)相应的诱导表达条带出现,其表达量约占全细胞蛋白的30%且以可溶形式存在。利用固定化金属离子(Ni2 )配体亲和层析柱纯化融合蛋白SSB,其纯度达到90%。通过凝胶层析和等离子共振技术对SSB的生物功能进行了系统研究分析。结果表明,SSB蛋白以四聚体形式与单链DNA分子结合,其亲和力常数(KD)为4.79×10-7mol/L。
%K SSB High expression Interaction Kinetic assay<br>SSB蛋白
%K 高效表达
%K 相互作用
%K 动力学
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=951380788B355DEA7D75520FA3B199C9&aid=B6D9F5A6C4118609&yid=A732AF04DDA03BB3&vid=DB817633AA4F79B9&iid=E158A972A605785F&sid=59906B3B2830C2C5&eid=BCA2697F357F2001&journal_id=1671-8135&journal_name=中国生物工程杂志&referenced_num=0&reference_num=21