Cloning, Expression and Purification of SH2-SH2-SH3 Domain of Huamn PLC-γ1
人源性基因PLC-γ1中SH2-SH2-SH3 结构域的克隆、表达及纯化

利用RT-PCR技术将人源性PLC-γ1中的SH2-SH2-SH3 结构域基因扩增并克隆到载体pGEX-2T中,经热激反应转化到大肠杆菌BL21菌株内,在低温(33℃)下、利用IPTG诱导表达构建的重组基因的高效表达体系,利用谷胱甘肽琼脂糖(sepharose )4B纯化得到高表达的重组蛋白.SDS-PAGE 和Western blot检测表明,PLC-γ1的SH2-SH2-SH3 结构域重组基因可在低温(33℃)条件下在E.coliBL21细胞中稳定完整表达,但是在较高温度下(37℃)会产生SH2-SH2-SH3 结构域不完全表达的现象.上述研究结果为人源性重组基因PLC-γ1中SH2-SH2-SH3 结构域的深入研究和广泛应用奠定了基础.