Transformation of CryK13V gene into protoplasts of Trichoderma viride
CryK13V基因对绿色木霉原生质体的转化

将Cry基因的13位赖氨酸(K)突变成缬氨酸(V)的突变基因CryK13V,构建于pCSN43载体,完成绿色木霉转化载体pCSNTCCm的构建.在研究绿色木霉(Trichoderma viride)原生质体形成和再生基础上,初步研究了绿色木霉转化条件.结果表明,绿色木霉原生质体形成的合适条件为pH 6.98磷酸盐缓冲液加入4 mg·mL-1glucanex,培养24 h的菌丝,40 r·min-1振荡条件下30℃酶解4 h,原生质体产量达到4.7×107个·mg-1.原生质体在0.3 mol·L-1肌醇和0.3 mol·L-1KCl的CM培养基上再生率为14.5%.用限制酶XhoⅠ介导将带有潮霉素抗性标记的CryK13V基因转化到绿色木霉中,转化率为每微克DNA得到1～2个转化子,转化子稳定性和PCR鉴定结果表明,外源基因已转入受体菌绿色木霉中.