转基因家蚕丝腺组织和转化家蚕培养细胞表达hIGF-Ⅰ

为实现在家蚕培养细胞和家蚕丝腺组织中表达人胰岛素样生长因子(hIGF-Ⅰ)基因,以家蚕丝胶基因启动子(Pser-1)驱动hIGF-Ⅰ基因,构建了带有家蚕杆状病毒ie-1启动子(Pie-1)控制的neo基因表达盒的转基因载体pigA3GFP-hIGF-ie-neo.在可表达转座酶的辅助质粒存在下,分别转染BmN培养细胞,以700~800μg/mL的G418筛选,获得了稳定转化细胞系.Western blotting分析可检测到hIGF-Ⅰ的特异性条带,ELISA检测结果显示,hIGF-I在5×105个细胞中的表达水平约7800pg.通过反向PCR分析表明,在转化细胞中外源DNA可通过随机整合或按照piggyBac特定的靶位点序列TTAA插入细胞基因组.转基因载体pigA3GFP-hIGF-ie-neo通过精子介导法导入蚕卵,利用neo,gfp基因的双重筛选,经过PCR和点杂交鉴定,获得了2头转基因家蚕.ELISA检测结果显示,在G1代hIGF-I在每克中部丝腺组织中的表达水平为2440pg左右.