The Modification of a Bacterial Artifical Chromosome Containing
用同源重组法修饰含人α类珠蛋白基因簇的细菌人工染色体 The Modification of a Bacterial Artifical Chromosome Containing

采用RecA蛋白介导的同源重组的方法，对本实验室筛选出的包含完整人α－类珠蛋白基因簇的细菌人工染色体（BAC）DNA进行删除修饰。首先采用PCR的方法，分别在预删除的HS－40增强子区域的上游和下游克隆长度约为500bp的两段同源序列，并一起克隆到构建载体pBV的XbaⅠ和HindⅢ位点上，SalⅠ酶切后回收1kb左右的片希并克隆温度敏感的穿梭质粒pSV-RecAk ,转化带有人α-类珠蛋白基因簇的BAC DNA的感受态大肠杆菌DH10B，经氯霉素正筛选和镰孢菌酸的负筛选，获得发生两次同源重组后只含BAC DNA而穿梭载体已丢失的菌株，经Southern杂交鉴定，获得了HS－40被定位删除的BAC突变体克隆。表明同源重组的方法可以对含有较多重复序列的BAC DNA进行准确的删除修饰。