稳定表达貉犬瘟热病毒细胞受体SLAM的Vero细胞系的建立及应用

摘要:【目的】信号淋巴激活分子(SLAM 又称CD150)为犬瘟热病毒(Canine distemper virus，CDV)的细胞受体。本研究目的在于建立稳定表达犬瘟热易感动物貉SLAM基因的Vero细胞系，用于犬瘟热诊断及CDV强毒株的快速分离。【方法】从重组质粒pMD-18-T-rSLAM扩增rSLAM 基因编码区，通过分子克隆技术构建真核表达质粒pIRES2-EGFP-rSLAMhis。将该质粒转染Vero细胞后，经EGFP荧光观察、G418抗性压力和单细胞克隆化及RT-PCR筛选表达rSLAM阳性细胞系。应用获得细胞系对临床犬瘟热病例进行病毒分离，对分离得到CDV进行RT-PCR鉴定及动物回归试验。【结果】经过RT-PCR和免疫组化试验证实，本实验筛选获得一株能稳定表达rSLAM的Vero细胞系———Vero-rSLAM。该细胞系接种CDV阳性样品36－48h即可产生典型CDV致细胞融合病变，而其亲本Vero细胞接种至6d均无可见细胞病变出现。应用Vero-rSLAM细胞系从狐狸、貉犬瘟热阳性病料中分离获得了3株犬瘟热病毒。其中犬瘟热病毒LN(10)f1株对易感狐狸、貉均可产生致死性感染。【结论】成功建立了稳定表达rSLAM的Vero细胞系，用它分离的CDV对本动物保 持较强的毒力。