Characterization and production optimization of a chitinase (Tachi1) from Trichoderma asperellum in recombinant Pichia Pastoris expression system
重组毕赤酵母表达棘孢木霉几丁质酶Tachi1的酶学性质研究及表达条件优化

摘要:【目的】对转棘孢木霉几丁质酶基因tachi1 的毕赤酵母工程菌GS-tachi1-K 进行诱导表达，研究重组几丁质酶Tachi1 的酶学性质，优化表达条件。【方法】对GS-tachi1-K 进行甲醇诱导培养，纯化目的蛋白Tachi1进行几丁质酶酶学性质的研究;通过单因素和正交试验对GS-tachi1-K 菌株产几丁质酶Tachi1 表达条件进行优化。【结果】GS-tachi1-K表达的几丁质酶Tachi1表观分子量约为44 kDa，酶反应最适的温度和pH分别为50℃和5.5，具有较宽的温度、pH 适用范围;50℃以下保持较高的酶活力，在碱性条件下稳定性较差;受Ag+、Hg2+、Cu2+、Fe2+和高浓度的SDS及β-巯基乙醇强烈抑制。该菌株的最佳表达条件为:pH 为6.5，甲醇诱导浓度为0.5%，起始细胞浓度为OD600=2，甲醇诱导时间为180 h;几丁质酶Tachi1活力可达17.93U/mL，蛋白表达量为6.19g/L。【结论】成功实现了棘孢木霉新几丁质酶基因tachi1的毕赤酵母高效分泌表达，工程菌GS-tachi1-K具有高表达量和表达产物酶活性高两个特点，明确了几丁质酶Tachi1 的酶学性质和最佳诱导表达条件，为该几丁质酶及其基因的深入研究和开发利用奠定了基础。