%0 Journal Article
%T Characterization and production optimization of a chitinase (Tachi1) from Trichoderma asperellum in recombinant Pichia Pastoris expression system<br>重组毕赤酵母表达棘孢木霉几丁质酶Tachi1的酶学性质研究及表达条件优化
%A Wei Tang
%A Yahua Li
%A Lu Liu
%A Junxia Zhang
%A Hongquan Xian
%A <br>汤伟
%A 李雅华
%A 刘露
%A 张军霞
%A 咸洪泉
%J 微生物学报
%D 2012
%I 
%X 摘要:【目的】对转棘孢木霉几丁质酶基因tachi1 的毕赤酵母工程菌GS-tachi1-K 进行诱导表达，研究重组几丁质酶Tachi1 的酶学性质，优化表达条件。【方法】对GS-tachi1-K 进行甲醇诱导培养，纯化目的蛋白Tachi1进行几丁质酶酶学性质的研究;通过单因素和正交试验对GS-tachi1-K 菌株产几丁质酶Tachi1 表达条件进行优化。【结果】GS-tachi1-K表达的几丁质酶Tachi1表观分子量约为44 kDa，酶反应最适的温度和pH分别为50℃和5.5，具有较宽的温度、pH 适用范围;50℃以下保持较高的酶活力，在碱性条件下稳定性较差;受Ag+、Hg2+、Cu2+、Fe2+和高浓度的SDS及β-巯基乙醇强烈抑制。该菌株的最佳表达条件为:pH 为6.5，甲醇诱导浓度为0.5%，起始细胞浓度为OD600=2，甲醇诱导时间为180 h;几丁质酶Tachi1活力可达17.93U/mL，蛋白表达量为6.19g/L。【结论】成功实现了棘孢木霉新几丁质酶基因tachi1的毕赤酵母高效分泌表达，工程菌GS-tachi1-K具有高表达量和表达产物酶活性高两个特点，明确了几丁质酶Tachi1 的酶学性质和最佳诱导表达条件，为该几丁质酶及其基因的深入研究和开发利用奠定了基础。
%K 关键词:
%K 毕赤酵母，棘孢木霉，几丁质酶，酶学性质，条件优化
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A3C6BA55AB623B90FA9104CFFC826F3C&aid=25B05CD99F2116702913A7BDCF020BA2&yid=99E9153A83D4CB11&vid=286FB2D22CF8D013&iid=38B194292C032A66&sid=3622B70F9C54A9CC&eid=EA64BD0B2FF6E786&journal_id=0001-6209&journal_name=微生物学报&referenced_num=0&reference_num=0