Pichia pastoris X-33 with OCH1 gene deletion and its expression of glycoprotein GM-CSF
毕赤酵母X-33OCH1基因敲除菌株的构建及其表达低糖基化蛋白GM-CSF

摘要: 【目的】酵母表达外源糖蛋白时会对蛋白进行过度N-糖基化修饰，产生高甘露糖型糖链，影响蛋白的活性，其中α-1,6-甘露糖转移酶(och1p)在这一过程中起着关键作用。通过敲除毕赤酵母X-33的α-1,6甘露糖转移酶(och1p)基因，获得一个对糖蛋白进行低糖基化修饰的毕赤酵母表达系统。【方法】采用双交换同源重组敲除目的基因的方法，首先敲除赤酵母X-33的URA3基因，获得一个尿嘧啶营养缺陷型的X-33(ura3-)菌株；然后用URA3基因作为选择标记，敲除X-33(ura3-)的α-1,6甘露糖转移酶(och1p)基因，获得OCH1基因敲除的X-33(och1-)菌株。用X-33 (och1-)菌表达糖蛋白GM-CSF，分析GM-CSF蛋白糖链的变化。【结果】首次成功敲除了X-33的URA3和OCH1基因，与野生型相比，X-33(och1-)菌表达的GM-CSF蛋白过度糖基化修饰程度明显降低。【结论】X-33(och1-)菌株的构建提供了一个对蛋白低N-糖基化修饰的毕赤酵母表达系统，也为进一步的糖基化改造提供了良好的基础。