%0 Journal Article
%T Pichia pastoris X-33 with OCH1 gene deletion and its expression of glycoprotein GM-CSF<br>毕赤酵母X-33OCH1基因敲除菌株的构建及其表达低糖基化蛋白GM-CSF
%A Dacheng Zhang
%A Yongli Xu
%A Xin Xin
%A Ruiyu Zhu
%A Jian Jin
%A <br>张大成
%A 许永利
%A 辛鑫
%A 朱瑞宇
%A 金坚
%J 微生物学报
%D 2011
%I 
%X 摘要: 【目的】酵母表达外源糖蛋白时会对蛋白进行过度N-糖基化修饰，产生高甘露糖型糖链，影响蛋白的活性，其中α-1,6-甘露糖转移酶(och1p)在这一过程中起着关键作用。通过敲除毕赤酵母X-33的α-1,6甘露糖转移酶(och1p)基因，获得一个对糖蛋白进行低糖基化修饰的毕赤酵母表达系统。【方法】采用双交换同源重组敲除目的基因的方法，首先敲除赤酵母X-33的URA3基因，获得一个尿嘧啶营养缺陷型的X-33(ura3-)菌株；然后用URA3基因作为选择标记，敲除X-33(ura3-)的α-1,6甘露糖转移酶(och1p)基因，获得OCH1基因敲除的X-33(och1-)菌株。用X-33 (och1-)菌表达糖蛋白GM-CSF，分析GM-CSF蛋白糖链的变化。【结果】首次成功敲除了X-33的URA3和OCH1基因，与野生型相比，X-33(och1-)菌表达的GM-CSF蛋白过度糖基化修饰程度明显降低。【结论】X-33(och1-)菌株的构建提供了一个对蛋白低N-糖基化修饰的毕赤酵母表达系统，也为进一步的糖基化改造提供了良好的基础。
%K 关键词:
%K N-糖基化，毕赤酵母X-33，基因敲除，粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A3C6BA55AB623B90FA9104CFFC826F3C&aid=66D929BF98C271D9A7F71F9C77DD7DDF&yid=9377ED8094509821&vid=987EDA49D8A7A635&iid=94C357A881DFC066&sid=6837BC93241057EF&eid=E4EC39E73004B593&journal_id=0001-6209&journal_name=微生物学报&referenced_num=0&reference_num=20