Cloning and expression of Micrococcus luteus IAM 14879 Rpf and its role in the recovery of the VBNC state in Rhodococcus sp.DS471
藤黄微球菌Rpf活性蛋白的制取及其对红球菌VBNC菌体的复苏作用

摘要:【目的】克隆藤黄微球菌Micrococcus luteus IAM 14879 (=NCIMB 13267)的复苏促进因子Rpf(resuscitation promoting factor) 的基因，在大肠杆菌中表达获取基因重组蛋白，考察对近缘高GC 革兰氏阳性菌红球菌Rhodococcus sp.DS471 活的非可培养VBNC (viable but non-culturable)菌体的复苏促进生长能力。【方法】抽提制备藤黄微球菌的DNA，确定rpf 基因引物进行PCR 扩增，利用pET15b 质粒载体并转化大肠杆菌DE3 表达，以SDS-PAGE 检验获取纯化重组蛋白;在培养基中添加Rpf，以MPN (most probable number) 法计数、评价对VBNC 状态菌体的复苏促进生长效果。【结果】基因测序证实获得藤黄微球菌的rpf 基因并在大肠杆菌中表达;SDS-PAGE 分析表明获得rpf 基因的重组蛋白;该蛋白对处于VBNC 状态的红球菌具有近100倍的复苏促进生长能力。【结论】成功克隆了藤黄微球菌的rpf 基因，在大肠杆菌中获得了表达，表明了Rpf 蛋白对处于VBNC 状态的红球菌具有复苏促进生长效果。