Producing Recombinant Adenovirus Encoding Green Fluorescent Protein (Ad-GFP) by Suspension Cultured HEK-293 N3S Cells
悬浮培养HEK-293 N3S细胞生产重组腺病毒Ad-GFP的实验研究

利用5L生物反应器悬浮培养HEK-293 N3S细胞生产携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒(recombinant adenovirus-green fluorescent protein，Ad-GFP)，为规模化生产腺病毒基因药物建立一种稳定可行的生产工艺。复苏的种子细胞进行逐级放大最后接入5L搅拌式生物反应器中，采用含5％胎牛血清（FBS）的DMEM/F12培基灌流培养293 N3S细胞，当细胞密度达到(2～4)×106个/mL时感染Ad-GFP，48h后收获细胞，经两步氯化铯超速离心获得纯化的Ad-GFP。采用紫外分光光度计比色法和高压液相色谱法（HPLC）测定病毒颗粒数和纯度，采用组织培养半数感染剂量（TCID50）法检测腺病毒的感染滴度。连续培养10～12d，细胞密度可达到(2～4)×1066个/mL左右，纯化的Ad-GFP感染滴度和颗粒数分别为1.0×1011IU/mL和1.68×1012VP/mL，比活性为6.0%，A260A280比值为1.33，产品纯度达到99.2%。建立了5L生物反应器悬浮培养293 N3S细胞生产重组腺病毒Ad-GFP的生产工艺，对携带其他基因的重组腺病毒药物生产具有一定的指导意义。