嗜热真菌Thermomyces lanuginosus热稳定几丁质酶基因的cDNA克隆及表达

根据Thermomyces lanuginosus热稳定几丁质酶Chit的N端氨基酸序列和同源保守序列设计简并引物，通过RTPCR及快速扩增cDNA末端（RACE）的方法，克隆了该几丁质酶的编码基因chit，全长cDNA为1500bp，包含一个由442个氨基酸组成的开放阅读框。该基因已在GenBank中注册，登录号为DQ092332。将成熟肽几丁质酶Chit阅读框与酵母表达载体pPIC9K连接，构建重组质粒pPIC9K/chit，转化毕赤酵母GS115，在甲醇的诱导下，成功地分泌出具生物活性的几丁质酶，诱导6d后酶活性达2.261U/mL，酶蛋白表达量为0.6mg/mL。该酶的最适反应温度和pH 值分别为60℃和5.5，该酶在50℃以下稳定；65℃的半衰期为40min。