Screening, identification and enzymatic properties of chitosanase-producing strain
产壳聚糖酶菌株的筛选、鉴定及酶学特性分析

【目的】利用筛选培养基, 从福建沿海潮间带泥样中分离筛选产壳聚糖酶的菌株, 并研究菌株的产酶特性。【方法】通过形态学观察, 结合26S rDNA序列进行分类鉴定, 采用DNS法测定酶活力。【结果】筛选得到产壳聚糖酶的菌株KQ-1002与草酸青霉(Penicillium oxalicum)的同源性为99%, 并初步鉴定为青霉属的一种。发酵培养的最适温度为30 °C, 最适碳源为1.0%水溶性壳聚糖, 最适氮源为1.87% (NH4)2SO4, 最适pH为6.0。该菌株液体发酵培养72 h产壳聚糖酶活性最高, 经优化后最高产酶量为18 U/mL。纯化后的壳聚糖酶经SDS-PAGE分析其分子量约40 kD。酶促反应最适pH为5.0, 最适反应温度为55 °C, Km值为1.293 g/L。在离子浓度为1.0×10?3 mol/L时, 金属离子Cu2+、Hg2+、Ag+对酶的活性均有强烈的抑制作用。壳聚糖酶对不同底物及脱乙酰度的壳聚糖具有不同的降解作用。【结论】筛选获得产壳聚糖酶的真菌菌株KQ-1002的壳聚糖酶活力经优化后提高了约7倍, 是一株具有研究和应用潜力的产壳聚糖酶菌株。