Cloning and Expression of Pneumococcal Surface Protein A and Its Cross-immunoreactivity
肺炎球菌表面蛋白A(PspA)的克隆表达及交叉免疫作用

本工作从中国临床最常见的5种荚膜血清型肺炎链球菌(FY01, FY05, FY6B, FY19F, FY23F)克隆获得编码PspA蛋白N端α-螺旋区的基因片段。分别将5种PspA基因片段克隆到表达载体pET-27b(+)上, 成功构建重组质粒pET-pspA, 转化大肠杆菌BL21(DE3)。经乳糖诱导表达和亲和层析分离, 获得高纯度重组蛋白。通过家族专属引物PCR的方法鉴定这5种荚膜血清型肺炎球菌的PspA蛋白所属家族, 并进一步根据基因测序结果通过生物信息学方法鉴定了所属支系。FY01 rPspA、FY6B rPspA、FY19F rPspA同属于家族Ⅰ支系1, FY05 rPspA属于家族Ⅰ支系2, FY23F rPspA属于家族Ⅱ支系3。以FY01 rPspA免疫小鼠, 在20 μg/mL免疫剂量时抗体滴度达到1: 210000, 显示了重组蛋白较好的免疫原性。Western blotting交叉免疫反应性研究表明, 抗FY01 rPspA抗血清与FY01 rPspA、FY6B rPspA和FY19F rPspA反应性较好, 而与另外两种重组蛋白几乎无反应, 提示PspA交叉免疫作用仅限于本支系内。动物保护实验表明, FY01 rPspA免疫的小鼠对FY6B、FY01 两种菌的攻击具有较好的保护作用, 对FY05、FY23F的攻击未见明显的保护作用。本研究成果对于研制高效肺炎球菌疫苗具有重要的指导意义。