小眼虫藻Δ8-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及其在酿酒酵母中的表达

Δ8途径是合成多不饱和脂肪酸的替代途径，Δ8-脂肪酸脱氢酶是该途径的关键酶之一。根据已报道的Δ8-脂肪酸脱氢酶基因设计引物，分别从小眼虫藻基因组DNA和cDNA中扩增得到该基因片段，序列分析表明：结构基因长1 266 bp，编码421个氨基酸；该基因没有内含子，比已经报道的Δ8-脂肪酸脱氢酶基因长6 bp，并且N末端序列也有所不同。利用酿酒酵母的载体pYES2.0构建Δ8-脂肪酸脱氢酶表达载体pYEFD，并转化到营养缺陷型酿酒酵母菌株INVSc1中，在选择培养基中筛选得到酿酒酵母转化菌株YD8。YD8在合适的培养条件下，添加外源底物二十碳二烯酸和二十碳三烯酸并诱导基因表达。脂肪酸甲酯气相色谱分析表明小眼虫藻Δ8-脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母中获得了高效表达，将二十碳二烯酸和二十碳三烯酸分别转化成二高-γ-亚麻酸和二十碳四烯酸，其底物转化率分别达到了31.2％和46.3％。