融合牛肠激酶轻链EKL包涵体蛋白的复性纯

大肠杆菌高密度发酵表达肠激酶轻链融合蛋白DsbA-rEKL，主要以包涵体形式存在。包涵体经4mol/L尿素和 0.5% Triton X100洗涤，以6mol/L盐酸胍、100mmol/L DTT溶解，在胱氨酸存在下，以脉冲加样方式复性。融合蛋白复性在6mmol/L胱氨酸存在下、脉冲加量0.03mg/mL和复性终蛋白浓度0.3mg/mL为最佳复性方案。 复性的融合蛋白加2mmol/L CaCL2后快速自切。经IDASepharose及Qsepharose 纯化，rEKL纯度可达95%以上，可高效酶切重组瑞特普酶融合蛋白Trx-rPA。实现了大规模生产rEKL，每升发酵液经复性及纯化后，可得rEKL 60mg/L以上，使以融合蛋白表达rPA等药用蛋白成为现实。