Research on Secretion Expression in Pichia pastoris and Function of the HC-Pro Gene of Watermelon Mosaic Virus
西瓜花叶病毒HC-Pro基因在毕赤酵母中的分泌表达与功能研究

利用RT-PCR方法扩增出西瓜花叶病毒HC-Pro的基因，长度为1371bp，并构建了真核表达质粒pPIC9K-WHC。将重组质粒经SalⅠ单酶切后电转化Pichia pastoris GS115菌株，经PCR鉴定与G418、MD和MM培养基筛选，获得Mut+/His+表型高拷贝转化子。经1%甲醇诱导5d后，SDS-PAGE检测发酵液上清，在66kD处有一特异蛋白条带表达。Western blot 鉴定表明，表达蛋白可以和HC-Pro蛋白抗血清发生结合反应。Far-Western blot 证明该蛋白能与西瓜花叶病毒CP蛋白结合，支持了HC-Pro蛋白协助传毒的“桥梁”学说。