Constructing and Expression of Three Zinc-fingers Peptide with Specific DNA Recognition Property in Escherichia coli
序列特异的三锌指多肽的构建及其在大肠杆菌中的表达

在获得单一锌指突变体的基础上，以小鼠转录因子Zif268的三锌指DNA结合区为模板，利用重叠(Over-lap)PCR技术，获得了关键氨基酸位点同时突变的三锌指突变体ZF123、2ZF123。ZF123、2ZF123分别克隆进pUC-18质粒，序列测定正确后，以pGEX-2T为表达质粒，在大肠杆菌JM109中实现了功能性的表达。经SDS-PAGE分析，表达出了分子量34.0kD的融合蛋白，扫描分析其含量在20%左右。菌体经超声波破碎后，对可溶性融合蛋白进行了纯化得到了游离的目的蛋白，为进一步的DNA结合特性分析、杂交转录因子的构建等奠定了基础。